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硝酸還原酶(NR)測試盒

簡要描述:

硝酸還原酶(NR)測試盒是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對生物體的毒害作用。

更新時間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:894

商品詳情:
硝酸還原酶(NR)測試盒測定意義

硝酸還原酶(NiR)是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對生物體的毒害作用。

貨號

規(guī)格

檢測方法

YSH3490

100管/48樣

微量法

YSH3490-1

50管/24樣

可見分光光度法

測定原理

亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。

需自備的儀器和用品

天平、研缽、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、低溫離心機(jī)。
樣品中AA提?。?/span>

1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3.血清等液體:直接檢測。

計算公式如下:

1、血清(漿)LAP活力的計算:

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬。

注意事項:

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個樣做預(yù)實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4.檢出限為100μmol/L。

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